Comparative study of DNA synthesis and nucleolar organizer regions of sinusoid littoral cells in mouse regenerating liver

Variations in DNA synthesis (DNAs) and Nucleolar Organizer Regions (NORs) were studied in the littoral cell population from regenerating liver of C3HS inbred mice standardized for periodicity analysis.Immunohistochemieal detection of Bromodeoxyuridine (BrdU) with a monoclonal antibody and silver staining of NORs (AgNORs) were assessed by means of a digital image analysis system in histological sections. Tissue samples were obtained every four hours from the 30th to the 54th hours after a partial hepatectomy. The results showed, in both parameters, a gradual increment of the values during the period studied, with highest values (DNAs 107.1 ± 16.1 SE; AgNORs 77. 3± 3.4 SE) located at 16:00/54 Time of Day / Hours Post Hepatectomy (TD/HPH), which were significantly different (p <0.001) from the values of the first sample (DNAs 38.1 ± 9.5 SE; AgNORs 27.3 ± 1.0 SE) taken at 16:00/30 TD/HPH. The results of our experiment demonstrate the existence of a strong correlation of DNA synthesis measured by BrdU immunohistoehemistry andAgNORs numbers in sinusoid littoral cells from mouse regenerating liver

DNA synthesis and nucleolar organizer regions circadian rhythm in mouse regenerating liver hepatocytes

DNA synthesis and Nucleolar Organizer Regions (NORs) were studied in C3HS inbred mice standardized for periodicity analysis. Immunohistochemical detection of Bromodeoxyuridine (BrdU) incorporated into DNA with a monoclonal antibody and silver staining of NORs (AgNORs) were assessed by means of a digital image analysis system in histological sections of regenerating liver. Tissue samples were obtained at different times after hepatectomy along a circadian span. The results showed a strong correlation of values between DNA synthesis (BrdU labelling index) and AgNOR numbers, with higher counts during the activity period of animals at 00:00/38 and 04:00/42 hours Time of Day/Hours Post-Hepatectomy (TD/HPH), being the differences with other time points highly significant. Our observations demonstrate the existence of a strong correlation of DNA synthesis measured by BrdU incorporation and AgNOR numbers with a defined circadian rhythm in mouse regenerating hepatocytes.

Effect of tissue and plasma factors on kidney proliferation

Liver extract, plasma from intact mice, ES2 tumour extract and plasma from tumour bearing mice has an inhibiting effect on the mitotic activity of hepatocytes and duodenal enterocytes. In the present experiments, the effect of these treatments on the mitotic activity of renal tubular cells was studied. C3HS 28 day-old male mice, standardized for periodicity analysis were used. The determination of normal mitotic circadian curve of the renocytes was done. A second batch of mice were injected with 0.01 ml/gr of either liver extract, plasma from intact mice, ES2 tumour extract or plasma from tumour bearing mice, at 16:00 hours and controlled at 08:00, 12:00 and 16:00 hs during 2 consecutive days post treatment. Colchicine (2 micrograms/gr) was injected 4 hours before killing. Kidneys were processed for histology and mitotic index determinations. Results were expressed as colchicine metaphases per 1000 nuclei, and showed that mitotic activity values of treated animals were significantly lower than those of controls. In conclusion, mitotic activity inhibition of renocytes may be due to some non specific plasmatic and/or tissue factors.

Accion del extracto de higado de ratones parcialmente hepatectomizados sobre la actividad mitotica de los enterocitos del raton joven / Action of liver extract from partially hepatectomized mice on the mitotic activity of young mouse enterocytes

En un trabajo anterior demonstramos que el plasma de retones adultos obtenido 36 horas post hepatectomía parcial, ejerce un efecto inhibitorio en la actividad mitótica de los enterocitos crípticos duodenales del ratón joven. En el presente trabajo se analiza la posibilidad de que dicho efecto se origine en algún factor del hígado regenerante. Para ello se estudia la acción del extracto de hígado de ratones adultos (90 días) obtenido 36 horas después de su hepatectomía parcial (70 por ciento), sobre la actividad mitótica de los enterocitos de ratones jóvenes, analizando 3 niveles celulares de las criptas duodenales. Se emplearon 36 ratones hembra de la cepa C3H/S de 27 días de edad la mitad de los cuales recibió, a las 16:00 horas, una inyección intraperitoneal de solución fisiológica, y restantes extracto hepático (0,01 ml/g). Lotes de 8 animales de cada grupo se sacrificaron a las 08:00/16, 12:00/20 y 16:00/24 (hora del día/horas post tratamiento) previa inyección de colchicina (2mug/g) 4 horas antes. Los resultados, expresados como metafases colchicínas por mil núcleos, demuenstran que la actividad mitótica, en los animales tratados con extracto, es significativamente menor con respecto a los testigos. El efecto inhibidor se manifesta en los niveles celulares de 1 a 4 y de 5 a 12 células de las criptas analizadas. En el nivel superior, de 13 a 20 células, no se aprecia ninguna modificación de la actividad proliferativa. Esta inhibición de la actividad mitótica de los enterocitos de las zonas basal y media de las criptas duodenales es probablemente debido a factores hepáticos difusibles.

Actividad mitotica de los enterocitos de las criptas duodenales en ratones portadores de un hepatocarcinoma / Mitotic activity of duodenal-crypt enterocytes in mice with hepatocarcinoma

La presencia de tumores injertados en el ratón generalmente provoca modificaciones de la proliferación de sus poblaciones celulares normales. En el presente trabajo se analiza la actividad mitótica (AM) de los enterocitos de las criptas duodenales del ratón injertado con el hepatocarcinoma ES12a. Se utilizan ratones C3H/S hembras de 28 días de edad, estandarizados para análisis de periodicidad, distribuidos en dos grupos: testigos y portadores del tumor injertado. Animales de ambos grupos se reparten en seis lotes [n = 6-10] que se sacrifican cada cuatro horas después de recibir una dosis de 2 mug/g de colchicina. Muestras de duodeno se fijan en formol tamponado al 10 por ciento y se procesan para la determinación de la actividad mitótica. Se controlan, por animal, los enterocitos correspondientes a 20 criptas, seccionadas longitudinalmente, registrando las células con metafase y su localización topográfica. A partir de estos valores se determinan los índices mitóticos (metafases colchicínicas x 1000 núcleos) de toda la cripta y de cada zona previamente establecida. Con estas cifras se define la X + SEM de cada lote. Las diferencias a comparar se analizan utilizando la prueba de "t"de Student. Los resultados demuestran que la presencia del tumor ES12a ejerce tanto un efecto inhibitorio sobre la AM de los enterocitos, como un desfasamiento de la curva circadiana de este parámetro de crecimiento.

Development of the effect of an indifferentiated tumour extract on sinusoid littoral cells of young growing liver

El extracto de un tumor indiferenciado de crecimiento rápido, inyectado a las 1600/00 horas (hora del día/horas postinyección) inhibe la actividad mitótica de las células litorales del hígado joven en crecimiento durante el período circadiano dle día siguiente. El extracto inhibe también el aumento en el número de células litorales (SLOC/1000 cells) que sólo alcanza los valores de los animales inyectados con solución fisiológica, 12 horas después, a las 0200/30 horas. En los días subsiguientes la actividad mitótica a las 1400/46, 1400/70 y 1400/94 horas, no muestra ningún cambio. Los valores del número de células litorales por 1000 células son significativamente menores en ratones inyectados con extracto a las 1400/46, 1400/70 y 1400/94 horas. La inyección del extracto a las 0700/00 horas no muestra ningún efecto cuando el control de la actividad mitótica se hace a las 1400/07 horas. El efecto sobre la actividad mitótica se explicaría por la acción del extracto en la última parte de G1 o en G1-S (o en ambas). En cuanto al efecto sobre el número de células litorales por 1000 células podría deberse a una acción sobre el comportamiento migratorio de los monocitos, que aparecerían en el hígado como células de Kupffer o sobre producción en médula ósea (o en ambos efectos)